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如何檢測(cè)蛋白泛素化水平
2024-01-15 15:58:59閱讀:-
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如何檢測(cè)蛋白泛素化水平
檢測(cè)蛋白泛素化水平可以通過(guò)免疫沉淀法、質(zhì)譜檢測(cè)法、免疫印跡法、熒光共振能量轉(zhuǎn)移法、酶活性檢測(cè)法等方法檢測(cè),需要去專業(yè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行分析檢測(cè)。
1、免疫沉淀法:需要將蛋白與特異性抗體或抗泛素化抗體結(jié)合,然后通過(guò)分離沉淀,得到泛素化蛋白質(zhì),之后可通過(guò)聚丙烯酰胺凝膠電泳等方法進(jìn)行檢測(cè),這種方法對(duì)于較復(fù)雜的蛋白在純度和特異性方面有局限性;
2、質(zhì)譜檢測(cè)法:需要通過(guò)質(zhì)譜儀對(duì)泛素化蛋白質(zhì)進(jìn)行檢測(cè),這種方法可以確定泛素化修飾的位置以及長(zhǎng)度,但技術(shù)要求較高,需要專業(yè)人員分析;
3、免疫印跡法:需要使用聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行蛋白質(zhì)分離提取,之后與抗泛素化抗體結(jié)合,進(jìn)行免疫印跡檢測(cè),但這種方法不夠敏感,對(duì)于低濃度的目標(biāo)蛋白無(wú)法識(shí)別,也無(wú)法定量;
4、熒光共振能量轉(zhuǎn)移法:這種方法檢測(cè)泛素化蛋白需要利用熒光標(biāo)記分子之間的能量轉(zhuǎn)移,方便監(jiān)測(cè)其動(dòng)態(tài)變化,提供定量以及部位信息,但需要的實(shí)驗(yàn)條件要求較高;
5、酶活性檢測(cè)法:這種方法需要通過(guò)檢測(cè)泛素化酶的活性來(lái)檢測(cè)泛素化蛋白,間接地了解其泛素化水平