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目前新生兒膽道閉鎖的確診屬于世界性難題，無特異性檢查可以確診膽道閉鎖，比較多見的是實(shí)驗(yàn)室檢查。膽道閉鎖通常表現(xiàn)為中度或者高度的直接膽紅素升高，占總膽紅素水平的50%-80%；轉(zhuǎn)氨酶正?；蜉p度增高，γ谷氨酸肽酶明顯增高，血清膽紅素水平持續(xù)不變或進(jìn)行性升高。特別是當(dāng)直接膽紅素占總膽紅素60%以上，是診斷膽道閉塞最重要的實(shí)驗(yàn)室檢查。

較多用的還有影像學(xué)檢查，膽總管閉鎖伴囊性擴(kuò)張具有診斷意義，同時(shí)可以幫助排除先天性膽管擴(kuò)張癥和其它膽道畸形，放射性核素掃描可以區(qū)分肝細(xì)胞功能障礙和膽道梗阻。CT、ERCT、MRCT與超聲相比，在膽道閉鎖的診斷方面并不具有優(yōu)勢(shì)。

目前國(guó)際上對(duì)嬰幼兒應(yīng)用CT的放射暴露已經(jīng)逐漸得到重視，建議不要輕易進(jìn)行CT檢查，開腹和腹腔鏡技術(shù)實(shí)施膽道造影檢查是確診的唯一方法，造影可以清晰顯示肝內(nèi)外膽道情況。膽囊穿刺為白膽汁，膽囊置管注入濃度30%左右的碘海醇注射液或者泛影葡胺，膽總管遠(yuǎn)端通暢而近端未顯影，需壓迫膽管再次造影，若無肝內(nèi)膽管顯影則診斷為膽道閉鎖。肝門部有囊腫可直接穿刺囊腫造影，膽囊比較塌陷無法置管時(shí)可診斷為膽道閉鎖。其他檢查包括經(jīng)皮肝穿刺、十二指腸引流液分析等，但臨床應(yīng)用比較少。